密度梯度離心機使用時有以下兩種離心法

　　1、差速區(qū)帶離心法：當不同的顆粒間存在沉降速度差時（不需要像差速沉降離心法所要求的那樣大的沉降系數(shù)差）。在一定的離心力作用下，顆粒各自以一定的速度沉降，在密度梯度介質(zhì)的不同區(qū)域上形成區(qū)帶的方法稱為差速區(qū)帶離心法。此法僅用于分離有一定沉降系數(shù)差的顆粒（20%的沉降系數(shù)差或更少）或分子量相差3倍的蛋白質(zhì)，與顆粒的密度無關(guān)，大小相同，密度不同的顆粒（如線粒體，溶酶體等）不能用此法分離。

 

　　離心管先裝好密度梯度介質(zhì)溶液，樣品液加在梯度介質(zhì)的液面上，離心時，由于離心力的作用，顆粒離開原樣品層，按不同沉降速度向管底沉降，離心一定時間后，沉降的顆粒逐漸分開，后形成一系列界面清楚的不連續(xù)區(qū)帶，沉降系數(shù)越大，往下沉降越快，所呈現(xiàn)的區(qū)帶也越低，離心必須在沉降快的大顆粒到達管底前結(jié)束，樣品顆粒的密度要大于梯度介質(zhì)的密度。梯度介質(zhì)通常用蔗糖溶液，其大密度和濃度可達1.28g/cm3和60%。

 

　　此密度梯度離心機的離心法的關(guān)鍵是選擇合適的離心轉(zhuǎn)速和時間

　　2、等密度區(qū)帶離心法：離心管中預先放置好梯度介質(zhì)，樣品加在梯度液面上，或樣品預先與梯度介質(zhì)溶液混合后裝入離心管，通過離心形成梯度，這就是預形成梯度和離心形成梯度的等密度區(qū)帶離心產(chǎn)生梯度的二種方式。

 

　　離心時，樣品的不同顆粒向上浮起，一直移動到與它們的密度相等的等密度點的特定梯度位置上，形成幾條不同的區(qū)帶，這就是等密度離心法。體系到達平衡狀態(tài)后，再延長離心時間和提高轉(zhuǎn)速已無意義，處于等密度點上的樣品顆粒的區(qū)帶形狀和位置均不再受離心時間所影響，提高轉(zhuǎn)速可以縮短達到平衡的時間，離心所需時間以小顆粒到達等密度點（即平衡點）的時間為基準，有時長達數(shù)日。

 

　　等密度離心法的分離效率取決于樣品顆粒的浮力密度差，密度差越大，分離效果越好，與顆粒大小和形狀無關(guān)，但大小和形狀決定著達到平衡的速度、時間和區(qū)帶寬度。

 

　　等密度區(qū)帶離心法所用的梯度介質(zhì)通常為氯化銫CSCl，其密度可達1.7g/cm3。此法可分離核酸、亞細胞器等，也可以分離復合蛋白質(zhì)，但簡單蛋白質(zhì)不適用。